Rakicidins是海洋微生物发酵产生的一类15元环缩肽类化合物，其结构中含极为罕见的4-氨基-2,4-戊二烯酸辛酰胺[1-5]。已有研究表明rakicidins类化合物具有较好的生物学活性，包括抗肿瘤细胞特别是其乏氧选择性抑制活性、抗临床致病艰难梭菌等厌氧菌以及抗耐万古霉素肠球菌等活性[6-8]。本文旨在通过对Sprague-Dawley(SD)大鼠的静脉和口服给药的药动学参数、急性毒性初步评估及鼠伤寒沙门菌回复突变试验的研究，为其进一步的临床前研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

SD 大鼠(SPF 级)购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，年龄为6 周龄，合格证编号为2，许可证号码为SCXK(沪)2013-0016。该动物在适应期进行一次详细临床观察、称重，均未见异常。体重在给药前一天随机分组时称量，雄性动物的体重范围为183.0～188.9g；雌性动物的体重范围为187.6～192.5g。

1.1.2 药品与试剂

Rakicidin B本实验室自制，结构见图1，批号：，纯度：99.8%。

静脉给药(IV): 称取所需量供试品，溶于5% DMSO+30% PEG400+65% HP-β-CD(20%羟丙基-β-环糊精Sigma原装进口)中，配成0.04mg/mL的无色澄清溶液(pH7)，用于静脉给药。

口服给药(PO)：称取所需量供试品，溶于0.5% CMC-Na(黏度300～800)中，涡旋振荡混匀，超声5min溶解，得到20mg/mL悬液，用于口服给药。

鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变试验(Ames试验)供试品：称取一定量的供试品溶解于DMSO，配制成1.25mg/mL的储备液，然后根据实验设计分别制备浓度为0.625、0.313 、0.156、0.078和0.039mg/mL的供试品溶液，涡旋至澄清溶液。

1.2 方法

1.2.1 药动学研究

挑选6只SD雄性大鼠，按照实验设计表分为2组，分别通过静脉和口服给药，给药当天给药1次，给药剂量分别为0.2和5.0mg/kg。试验前禁食12h，自由饮水。对所有动物每天进行2次笼边观察，以确定其是否有发病、损害或死亡等状况出现，以及供食和供水是否充足。试验过程中所有给药动物在给药前，给药后及采血前进行详细临床观察。

图1 Rakicidin B化学结构Fig.1 Chemical structure of rakicidin B

静脉给药组在给药前和给药后0.083、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和24.0h从颈静脉穿刺采集血样；口服给药组在给药前和给药后0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和24.0h从颈静脉穿刺采集血样用于血药浓度检测。

样品经颈静脉采血约0.25mL，加入肝素钠抗凝，血液样本采集后置于冰上，离心分离血浆(8000r/min, 6min, 4℃)。收集的血浆分析前存放于-80℃。生物样品分析方法及所有样品的分析由美迪西普亚(上海)生物医药有限公司分析实验室完成，分析样品的同时进行质控样品的日内准确度评价，并要求超过66.7%的质控样品的准确度在85%～115%之间。

1.2.2 毒理学研究

(1) SD大鼠单次静脉给予rakicidin B急性毒性试验：观察SD大鼠单次经静脉给予rakicidin B毒性反应，为后续毒性试验以及临床试验设计提供参考。

挑选40只SD大鼠，雌雄各半，按性别和体重大小通过简单随机化分组方式分为4组每组10只，雌雄各半。第1组为溶媒对照组(剂量为0)，第2～4组为rakicidin B给药组，剂量分别为0.2、0.5和1mg/kg。给药方式为静脉注射，给药体积为5mL/kg。

试验期间每天进行两次笼边观察，连续观察14d。体重在分组当日(Day-1)、试验第1、4、7、10和14天以及动物安乐死前分别称重记录。试验第2(Day 2～3)、7(Day7～8)、13(Day13～14)天测定动物(24±1)h耗食量并记录。

所有存活的试验动物在试验结束时(第15天)用二氧化碳吸入麻醉的方法进行安乐死，并进行大体解剖检查，观察并摘取所有脏器并记录。

(2) SD大鼠口服灌胃rakicidin B急性毒性试验：观察SD大鼠24h内多次灌胃给予rakicidin B对受试动物可能产生的毒性反应及其严重程度，对该药物的啮齿类动物急性毒性进行初步评估为后续毒性试验以及临床试验设计提供参考。

每组10只SD大鼠，雌雄各半，rakicidin B给药，剂量为200、600和1000mg/kg，每组每性别5只动物。给药方式为经口灌胃，给药体积为20mL/kg。

试验期间每天进行两次笼边观察，连续观察14d。体重在分组当日(Day-1)、试验第1、4、7、10、14天以及动物安乐死前分别称重记录。试验第2(Day 2～3)、7(Day7～8)、13(Day13～14)天测定实验动物(24±1)h耗食量。所有存活的试验动物在试验结束时(第15天)用二氧化碳吸入麻醉的方法进行安乐死，并进行大体解剖检查，观察并摘取所有脏器并记录。

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